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脑片膜片钳系统 (Patch-clamp system)
2010-06-11 06:48   发布范围:公开

 

                  

 

脑片膜片钳系统包括奥林巴斯红外显微镜一部,MP-255操纵手一台,国产操纵手一台,SUTTER P-97电极拉制仪及VIBRATOME 100 PLUSE切片机各一台,价值60.955万元。

脑片膜片钳系统主要的实验流程:

1. ACC脑薄片的制备: 小鼠采用1-2%异氟醚麻醉,振动切片机横向切取300μm ACC脑片,室温下置于混合气(95 % O2 5% CO2)饱和的人工脑脊液(ACSF)中,恢复1h后进行实验。ACSF组成(in mM): NaCl, 124; NaHCO3, 25; KCl, 4.4; KH2PO4, 1; CaCl2, 2; MgSO4, 2; glucose, 10。记录时脑片放置于记录小池中,ACSF循环灌流,混合气(95 % O2 5% CO2)饱和,室温下记录电生理信号。

2. 全细胞膜片钳记录: 在具有红外线DIC系统的显微镜(Leica, Germany)下观察BLA神经元。锥体神经元记录与中间神经元的区别有形态学差异和电生理差异,锥体神经元表现为电流钳下诱发的动作电位频率低,有很强的适应性(adaptation),而中间神经元的动作电位频率高,则无明显的适应性且有显著的后超极化电位(after hyperpolarization, AHP)

3. 在脑片第层刺激神经元,顺神经纤维记录并分析相应的II/III层锥体神经元的电信号。

脑片膜片钳系统主要开设实验项目主要有4个,分别是:

1. 探索相关信号分子参与信号通路的调节对LTPLTD的影响。从而反映对大脑学习记忆功能的影响。

2. 记录并分析药物对神经元双脉冲易化的影响,反映神经元突触前释放的变化。

3. 采用脑薄片全细胞膜片钳技术,记录神经元的兴奋性突出后电位,从而检测药物对神经元前扣带回II/III层锥体神经元兴奋性的影响。

4. 电生理记录微小兴奋性突触后电流(mEPSC),并分析电流的动力学过程,考察AMPA受体功能的变化。

5. 采用记录电极内液给药或置换技术,阻断或激活相应的信号转导分子和PSD内突触蛋白的功能,干扰AMPA受体细胞内C-端酶调节位点,观察对多巴胺对可塑性功能的影响。

 

 

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